Efekti i ndryshimit të temperaturës në kulturën qelizore
Temperatura është një parametër i rëndësishëm në kulturën qelizore sepse ndikon në riprodhueshmërinë e rezultateve. Ndryshimet e temperaturës mbi ose nën 37°C kanë një efekt shumë të rëndësishëm në kinetikën e rritjes qelizore të qelizave të gjitarëve, të ngjashme me atë të qelizave bakteriale. Ndryshimet në shprehjen e gjeneve dhe modifikimet në strukturën qelizore, përparimin e ciklit qelizor, stabilitetin e mRNA-së mund të zbulohen në qelizat e gjitarëve pas një ore në 32ºC. Përveç ndikimit të drejtpërdrejtë në rritjen e qelizave, ndryshimet në temperaturë ndikojnë edhe në pH-in e mjedisit, pasi tretshmëria e CO2 ndryshon pH-in (pH rritet në temperatura më të ulëta). Qelizat e kultivuara të gjitarëve mund të tolerojnë ulje të ndjeshme të temperaturës. Ato mund të ruhen në 4 °C për disa ditë dhe mund të tolerojnë ngrirjen në -196 °C (duke përdorur kushte të përshtatshme). Megjithatë, ato nuk mund të tolerojnë temperatura mbi rreth 2 °C mbi normalen për më shumë se disa orë dhe do të vdesin shpejt në 40 °C e lart. Për të siguruar riprodhueshmërinë maksimale të rezultateve, edhe nëse qelizat mbijetojnë, duhet të tregohet kujdes për të ruajtur temperaturën sa më konstante të jetë e mundur gjatë inkubacionit dhe trajtimit të qelizave jashtë inkubatorit.
Arsyet e ndryshimeve të temperaturës brenda inkubatorit
Do të keni vënë re se kur hapet dera e inkubatorit, temperatura bie me shpejtësi në vlerën e caktuar prej 37 °C. Në përgjithësi, temperatura do të rikuperohet brenda pak minutash pasi dera të mbyllet. Në fakt, kulturat statike kanë nevojë për kohë për t'u rikuperuar në temperaturën e caktuar në inkubator. Një numër faktorësh mund të ndikojnë në kohën që i duhet një kulture qelizore për të rifituar temperaturën pas trajtimit jashtë inkubatorit. Këta faktorë përfshijnë:
- ▶ kohëzgjatja e qëndrimit të qelizave jashtë inkubatorit
- ▶ lloji i balonit në të cilin rriten qelizat (gjeometria ndikon në transferimin e nxehtësisë)
- ▶Numri i kontejnerëve në inkubator.
- ▶ Kontakti i drejtpërdrejtë i shisheve me raftin e çelikut ndikon në shkëmbimin e nxehtësisë dhe shpejtësinë e arritjes së temperaturës optimale, prandaj është më mirë të shmangni pirgjet e shisheve dhe të vendosni secilën enë
- ▶ direkt në raftin e inkubatorit.
Temperatura fillestare e çdo ene dhe mjedisi të freskët të përdorur do të ndikojë gjithashtu në kohën që duhet që qelizat të jenë në gjendjen e tyre optimale; sa më e ulët të jetë temperatura e tyre, aq më shumë kohë duhet.
Nëse të gjithë këta faktorë ndryshojnë me kalimin e kohës, ata do të rrisin edhe ndryshueshmërinë midis eksperimenteve. Është e nevojshme të minimizohen këto luhatje të temperaturës, edhe nëse nuk është gjithmonë e mundur të kontrollohen të gjitha (sidomos nëse disa persona përdorin të njëjtin inkubator).
Si të minimizohen ndryshimet e temperaturës dhe të zvogëlohet koha e rikuperimit të temperaturës
Duke e ngrohur paraprakisht mediumin
Disa studiues janë mësuar të ngrohin paraprakisht shishet e plota të mediumit në një banjë uji 37 °C për t'i sjellë ato në këtë temperaturë para përdorimit. Është gjithashtu e mundur të ngrohet paraprakisht mediumi në një inkubator që përdoret vetëm për ngrohjen paraprake të mediumit dhe jo për kulturën qelizore, ku mediumi mund të arrijë një temperaturë optimale pa shqetësuar kulturat qelizore në një inkubator tjetër. Por kjo, për aq sa dimë ne, zakonisht nuk është një shpenzim i përballueshëm.
Brenda Inkubatorit
Hapni derën e inkubatorit sa më pak të jetë e mundur dhe mbylleni sa më shpejt. Shmangni pikat e ftohta, të cilat krijojnë ndryshime temperature në inkubator. Lini hapësirë midis shisheve për të lejuar qarkullimin e ajrit. Raftet brenda inkubatorit mund të jenë të shpuara. Kjo lejon shpërndarje më të mirë të nxehtësisë pasi lejon ajrin të kalojë nëpër vrima. Megjithatë, prania e vrimave mund të çojë në ndryshime në rritjen e qelizave, sepse ka një ndryshim temperature midis zonës me vrima dhe zonës me meta. Për këto arsye, nëse eksperimentet tuaja kërkojnë rritje shumë uniforme të kulturës qelizore, mund t'i vendosni shishet e kulturës në mbështetëse metalike me sipërfaqe kontakti më të vogla, të cilat zakonisht nuk janë të nevojshme në kulturën rutinë të qelizave.
Minimizimi i kohës së përpunimit të qelizave
Për të minimizuar kohën e kaluar në procesin e trajtimit të qelizave, duhet të:
- ▶ Organizoni të gjitha materialet dhe mjetet e nevojshme përpara se të filloni punën.
- ▶ Punoni shpejt dhe pa probleme, duke shqyrtuar metodat eksperimentale paraprakisht në mënyrë që operacionet tuaja të bëhen përsëritëse dhe të automatizuara.
- ▶ Minimizoni kontaktin e lëngjeve me ajrin e ambientit.
- ▶Mbani një temperaturë konstante në laboratorin e kulturës qelizore ku punoni.
Koha e postimit: 03 Janar 2024