Pengaruh variasi suhu pada kultur sel
Suhu merupakan parameter penting dalam kultur sel karena memengaruhi reproduktifitas hasil. Perubahan suhu di atas atau di bawah 37°C memiliki efek yang sangat signifikan terhadap kinetika pertumbuhan sel mamalia, serupa dengan sel bakteri. Perubahan ekspresi gen dan modifikasi struktur sel, progresi siklus sel, stabilitas mRNA dapat dideteksi dalam sel mamalia setelah satu jam pada suhu 32ºC. Selain memengaruhi pertumbuhan sel secara langsung, perubahan suhu juga memengaruhi pH media, karena kelarutan CO2 mengubah pH (pH meningkat pada suhu yang lebih rendah). Sel mamalia yang dikultur dapat mentoleransi penurunan suhu yang signifikan. Sel-sel ini dapat disimpan pada suhu 4 °C selama beberapa hari dan dapat mentoleransi pembekuan hingga -196 °C (dengan kondisi yang sesuai). Namun, sel-sel ini tidak dapat mentoleransi suhu di atas sekitar 2 °C di atas normal selama lebih dari beberapa jam dan akan cepat mati pada suhu 40 °C ke atas. Untuk memastikan reproduktifitas hasil yang maksimal, bahkan jika sel bertahan hidup, perlu diperhatikan untuk menjaga suhu sekonstan mungkin selama inkubasi dan penanganan sel di luar inkubator.
Alasan terjadinya variasi suhu di dalam inkubator
Anda mungkin memperhatikan bahwa ketika pintu inkubator dibuka, suhu turun dengan cepat ke nilai yang ditetapkan, yaitu 37°C. Umumnya, suhu akan pulih dalam beberapa menit setelah pintu ditutup. Faktanya, kultur statis membutuhkan waktu untuk kembali ke suhu yang ditetapkan di dalam inkubator. Sejumlah faktor dapat memengaruhi waktu yang dibutuhkan kultur sel untuk kembali ke suhu yang ditetapkan setelah perlakuan di luar inkubator. Faktor-faktor ini meliputi:
- ▶lamanya sel berada di luar inkubator
- ▶jenis labu tempat sel ditumbuhkan (geometri memengaruhi perpindahan panas)
- ▶Jumlah wadah dalam inkubator.
- ▶Kontak langsung labu dengan rak baja mempengaruhi pertukaran panas dan kecepatan mencapai suhu optimal, jadi lebih baik hindari tumpukan labu dan letakkan setiap wadah
- ▶langsung di rak inkubator.
Suhu awal wadah dan media baru yang digunakan juga akan memengaruhi waktu yang dibutuhkan sel untuk berada pada kondisi optimalnya; semakin rendah suhunya, semakin lama waktu yang dibutuhkan.
Jika semua faktor ini berubah seiring waktu, variabilitas antar eksperimen juga akan meningkat. Fluktuasi suhu ini perlu diminimalkan, meskipun tidak selalu memungkinkan untuk mengontrol semuanya (terutama jika beberapa orang menggunakan inkubator yang sama).
Cara meminimalkan variasi suhu dan mengurangi waktu pemulihan suhu
Dengan memanaskan terlebih dahulu media
Beberapa peneliti terbiasa memanaskan seluruh botol media dalam penangas air bersuhu 37°C untuk mencapai suhu tersebut sebelum digunakan. Media juga dapat dipanaskan terlebih dahulu dalam inkubator yang hanya digunakan untuk pemanasan awal media, bukan untuk kultur sel, di mana media dapat mencapai suhu optimal tanpa mengganggu kultur sel di inkubator lain. Namun, sejauh yang kami ketahui, hal ini biasanya bukan biaya yang terjangkau.
Di Dalam Inkubator
Buka pintu inkubator sesedikit mungkin dan tutup secepat mungkin. Hindari tempat dingin yang dapat menyebabkan perbedaan suhu di dalam inkubator. Sisakan ruang di antara labu agar udara dapat bersirkulasi. Rak di dalam inkubator dapat dilubangi. Hal ini memungkinkan distribusi panas yang lebih baik karena udara dapat melewati lubang-lubang tersebut. Namun, keberadaan lubang dapat menyebabkan perbedaan pertumbuhan sel, karena terdapat perbedaan suhu antara area berlubang dan area yang mengandung metanol. Oleh karena itu, jika percobaan Anda membutuhkan pertumbuhan kultur sel yang sangat seragam, Anda dapat menempatkan labu kultur pada penyangga logam dengan permukaan kontak yang lebih kecil, yang biasanya tidak diperlukan dalam kultur sel rutin.
Meminimalkan Waktu Pemrosesan Sel
Untuk meminimalkan waktu yang dihabiskan dalam proses perawatan sel, Anda perlu
- ▶Siapkan semua bahan dan alat yang diperlukan sebelum Anda mulai bekerja.
- ▶Bekerja dengan cepat dan lancar, meninjau metode eksperimen terlebih dahulu sehingga operasi Anda menjadi berulang dan otomatis.
- ▶Minimalkan kontak cairan dengan udara sekitar.
- ▶Pertahankan suhu konstan di laboratorium kultur sel tempat Anda bekerja.
Waktu posting: 03-Jan-2024