Sıcaklık değişiminin hücre kültürü üzerindeki etkisi
Sıcaklık, hücre kültüründe sonuçların tekrarlanabilirliğini etkilediği için önemli bir parametredir. 37°C'nin üzerindeki veya altındaki sıcaklık değişimleri, bakteri hücrelerine benzer şekilde memeli hücrelerinin hücre büyüme kinetiği üzerinde çok önemli bir etkiye sahiptir. Gen ifadesindeki değişiklikler ve hücresel yapı, hücre döngüsü ilerlemesi ve mRNA stabilitesindeki modifikasyonlar, 32°C'de bir saat sonra memeli hücrelerinde tespit edilebilir. Sıcaklık değişiklikleri, hücre büyümesini doğrudan etkilemesinin yanı sıra, CO2'nin çözünürlüğü pH'ı değiştirdiğinden (pH daha düşük sıcaklıklarda artar) ortamın pH'ını da etkiler. Kültürlenmiş memeli hücreleri önemli sıcaklık düşüşlerine tolerans gösterebilir. 4°C'de birkaç gün saklanabilirler ve uygun koşullar kullanıldığında -196°C'ye kadar dondurulabilirler. Ancak, normalin yaklaşık 2°C üzerindeki sıcaklıklara birkaç saatten fazla dayanamazlar ve 40°C ve üzerindeki sıcaklıklarda hızla ölürler. Hücreler hayatta kalsa bile sonuçların maksimum tekrarlanabilirliğini sağlamak için, hücrelerin inkübasyonu ve inkübatör dışında taşınması sırasında sıcaklığın mümkün olduğunca sabit tutulmasına dikkat edilmelidir.
Kuluçka makinesi içindeki sıcaklık değişimlerinin nedenleri
İnkübatör kapağı açıldığında sıcaklığın hızla ayarlanan 37°C değerine düştüğünü fark etmişsinizdir. Genellikle, kapak kapatıldıktan sonra sıcaklık birkaç dakika içinde eski haline döner. Aslında, statik kültürlerin inkübatörde ayarlanan sıcaklığa ulaşması için zamana ihtiyacı vardır. Bir hücre kültürünün inkübatör dışında işlemden sonra tekrar sıcaklığa kavuşması için gereken süreyi etkileyen bir dizi faktör vardır. Bu faktörler şunlardır:
- ▶hücrelerin inkübatör dışında kaldığı süre
- ▶hücrelerin büyütüldüğü şişenin türü (geometri ısı transferini etkiler)
- ▶Kuluçka makinesindeki kap sayısı.
- ▶Flakonların çelik rafla doğrudan teması, ısı değişimini ve optimum sıcaklığa ulaşma hızını etkiler, bu nedenle flakonların üst üste istiflenmesinden kaçınılmalı ve her bir kap aynı hizada olacak şekilde yerleştirilmelidir.
- ▶doğrudan kuluçka makinesinin rafında.
Kullanılan herhangi bir taze kap ve ortamın başlangıç sıcaklığı, hücrelerin optimum duruma gelmesi için gereken süreyi de etkileyecektir; sıcaklıkları ne kadar düşükse, bu o kadar uzun sürer.
Tüm bu faktörler zamanla değişirse, deneyler arasındaki değişkenlik de artacaktır. Her şeyi kontrol etmek her zaman mümkün olmasa da (özellikle aynı inkübatörü birden fazla kişi kullanıyorsa), bu sıcaklık dalgalanmalarını en aza indirmek gerekir.
Sıcaklık değişimlerini en aza indirme ve sıcaklık toparlanma süresini kısaltma
Ortamı önceden ısıtarak
Bazı araştırmacılar, kullanmadan önce tüm besiyeri şişelerini 37°C'lik bir su banyosunda önceden ısıtarak bu sıcaklığa getirmeyi tercih ederler. Ayrıca, besiyerini yalnızca besiyeri ön ısıtması için kullanılan ve hücre kültürü için kullanılmayan bir inkübatörde önceden ısıtmak da mümkündür. Bu sayede, besiyeri, başka bir inkübatördeki hücre kültürlerini bozmadan optimum sıcaklığa ulaşabilir. Ancak bildiğimiz kadarıyla bu, genellikle karşılanabilir bir masraf değildir.
Kuluçka Makinesinin İçinde
İnkübatör kapağını mümkün olduğunca az açın ve hemen kapatın. İnkübatörde sıcaklık farkları yaratan soğuk noktalardan kaçının. Havanın dolaşımı için şişeler arasında boşluk bırakın. İnkübatörün içindeki raflar delikli olabilir. Bu, deliklerden havanın geçmesine izin vererek daha iyi ısı dağılımı sağlar. Ancak deliklerin varlığı, delikli alan ile meta içeren alan arasında sıcaklık farkı olduğundan hücre büyümesinde farklılıklara yol açabilir. Bu nedenlerden dolayı, deneyleriniz hücre kültürünün oldukça homojen büyümesini gerektiriyorsa, kültür şişelerini rutin hücre kültüründe genellikle gerekli olmayan daha küçük temas yüzeylerine sahip metal destekler üzerine yerleştirebilirsiniz.
Hücre İşleme Süresini En Aza İndirme
Hücre tedavisi sürecinde harcanan süreyi en aza indirmek için,
- ▶Çalışmaya başlamadan önce gerekli tüm malzemeleri ve araçları hazırlayın.
- ▶Operasyonlarınızın tekrarlayıcı ve otomatik hale gelmesi için deneysel yöntemleri önceden inceleyerek hızlı ve sorunsuz çalışın.
- ▶Sıvıların ortam havasıyla temasını en aza indirin.
- ▶Çalıştığınız hücre kültürü laboratuvarında sabit bir sıcaklık sağlayın.
Gönderi zamanı: 03-01-2024