ควรเติมอาหารเลี้ยงเชื้อปริมาณเท่าใดลงในขวดทดลองในตู้อบแบบเขย่า?
ขวดเพาะเลี้ยงเซลล์แบบ Erlenmeyer ที่ปลอดเชื้อของ RADOBIO ได้รับการออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอย รวมถึงเซลล์ HEK 293 และ CHO ในสภาวะปลอดเชื้อตู้ฟักแบบเขย่าขวดเพาะเลี้ยงเหล่านี้มีก้นแบนและฝาปิดแบบมีรูระบายอากาศ ทำให้เหมาะสำหรับการพัฒนา การขยายขนาด และการเพาะเลี้ยงหลายขั้นตอนในกระบวนการผลิตขนาดเล็ก ฝาปิดแบบมีรูระบายอากาศประกอบด้วยเยื่อไฮโดรโฟบิกขนาด 0.2 ไมโครเมตร ซึ่งช่วยให้การแลกเปลี่ยนก๊าซมีประสิทธิภาพ ในขณะเดียวกันก็ป้องกันการปนเปื้อนของจุลินทรีย์และการซึมผ่านของน้ำ ทำให้มั่นใจได้ถึงสภาวะการเจริญเติบโตของเซลล์ที่เหมาะสมที่สุด
ข้อมูลจำเพาะที่สำคัญและแนวทางการใช้งาน
- 1. การเพิ่มประสิทธิภาพปริมาตรการทำงาน
- •ควรคงปริมาตรของตัวกลางไว้ที่ 20–30% ของความจุทั้งหมดของขวด เพื่อให้แน่ใจว่ามีการถ่ายเทออกซิเจนอย่างเพียงพอและลดแรงเฉือนให้น้อยที่สุด
- •ขีดบอกปริมาตรที่ชัดเจนบนขวดช่วยให้สามารถวัดปริมาตรได้อย่างแม่นยำ .
- •ควรคงปริมาตรของตัวกลางไว้ที่ 20–30% ของความจุทั้งหมดของขวด เพื่อให้แน่ใจว่ามีการถ่ายเทออกซิเจนอย่างเพียงพอและลดแรงเฉือนให้น้อยที่สุด
- 2. พารามิเตอร์การเขย่า
- •ที่แนะนำเครื่องเขย่าฟักไข่ความเร็วในการเขย่า: 75–120 รอบต่อนาที (ปรับได้ตามความต้องการในการทดลอง)
- •สำหรับขวดขนาดใหญ่ (≥3 ลิตร) ให้ลดความเร็วลงเหลือ 90 รอบต่อนาที เพื่อป้องกันการเฉือนของของเหลวมากเกินไปและการเกิดฟอง
- •ที่แนะนำเครื่องเขย่าฟักไข่ความเร็วในการเขย่า: 75–120 รอบต่อนาที (ปรับได้ตามความต้องการในการทดลอง)
พารามิเตอร์ที่แนะนำสำหรับเซลล์ CHO และ HEK 293
| ปริมาตรขวด | ปริมาณการทำงาน | ความเร็วในการสั่น |
|---|---|---|
| 125 มล. | 25 มล. | 120 รอบต่อนาที |
| 250 มล. | 60 มล. | 120 รอบต่อนาที |
| 500 มล. | 150 มล. | 120 รอบต่อนาที |
| 1000 มล. | 350 มล. | 120 รอบต่อนาที |
| 1500 มล. | 400 มล. | 120 รอบต่อนาที |
| 2000 มล. | 400 มล. | 120 รอบต่อนาที |
| 3000 มล. | 800 มล. | 90 รอบต่อนาที |
| 5000 มล. | 2500 มล. | 90 รอบต่อนาที |
หมายเหตุ: ข้อมูลนี้ใช้ได้กับเซลล์สายพันธุ์ CHO Stable, CHO Transient และ HEK 293 Transient
รายละเอียดทางเทคนิคเพิ่มเติม
- 1. วัสดุและความปลอดเชื้อ
- • ตัวเลือกวัสดุ PETG/PC:PETG มีความโปร่งใสสูงและทนทานต่อแรงกระแทก ในขณะที่ PC มีเสถียรภาพทางความร้อนที่เหนือกว่า (ทนต่อการนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121°C)
-
- •การฆ่าเชื้อ: ผ่านการฉายรังแกแกมมา บรรจุแยกชิ้น ผ่านการรับรองว่าปราศจาก DNase/RNase ปราศจากเอนโดท็อกซิน และเป็นไปตามมาตรฐาน USP Class VI
- • ตัวเลือกวัสดุ PETG/PC:PETG มีความโปร่งใสสูงและทนทานต่อแรงกระแทก ในขณะที่ PC มีเสถียรภาพทางความร้อนที่เหนือกว่า (ทนต่อการนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121°C)
- 2. ข้อดีด้านการออกแบบ
- • ฝาปิดออกแบบตามหลักสรีรศาสตร์: ช่วยให้จับถนัดมือและใช้งานร่วมกับปิเปต/เครื่องขูดเซลล์ได้
- •มีรุ่นที่มีแผ่นกั้นให้เลือก: ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการผสมสำหรับการเพาะเลี้ยงที่มีความหนาแน่นสูงโดยการเพิ่มการถ่ายเทออกซิเจน (kLa)
- • ฝาปิดออกแบบตามหลักสรีรศาสตร์: ช่วยให้จับถนัดมือและใช้งานร่วมกับปิเปต/เครื่องขูดเซลล์ได้
- 3. หมายเหตุสำคัญเกี่ยวกับการใช้งาน
- •หลีกเลี่ยงการเติมมากเกินไป: ปริมาตรที่มากกว่า 30% อาจลดการแลกเปลี่ยนก๊าซ ทำให้เกิดภาวะขาดออกซิเจนในวัฒนธรรมแบบใช้ออกซิเจน
- •ตรวจสอบค่า pH/ออกซิเจน: รักษาค่า pH ให้อยู่ที่ 7.0–7.4 (เซลล์ CHO) และออกซิเจนละลาย (DO) >40% เพื่อการเผาผลาญที่เหมาะสม
- •ความไวต่อแรงเฉือน: สำหรับเซลล์ที่ไวต่อแรงเฉือน (เช่น เซลล์ T ปฐมภูมิ) ให้ใช้ความเร็วรอบต่ำ (80–100 รอบต่อนาที) หรือใช้สารป้องกันการเกิดฟอง
- •หลีกเลี่ยงการเติมมากเกินไป: ปริมาตรที่มากกว่า 30% อาจลดการแลกเปลี่ยนก๊าซ ทำให้เกิดภาวะขาดออกซิเจนในวัฒนธรรมแบบใช้ออกซิเจน
การประยุกต์ใช้ที่นอกเหนือจากการเพาะปลูกแบบมาตรฐาน
- •ระบบเพอร์ฟิวชั่น: ผสานรวมเข้ากับท่อส่งสารอาหารเพื่อการจ่ายสารอาหารอย่างต่อเนื่อง ทำให้ได้ความหนาแน่นของเซลล์มากกว่า 20 × 10⁶ เซลล์/มล.
- •จุลินทรีย์เพาะเลี้ยง: เหมาะสำหรับการหมักแบคทีเรีย/ยีสต์ โดยมีแผ่นกั้นเพื่อการเติมอากาศที่ดีขึ้น
- •โปรโตคอลการขยายขนาด: เมื่อเปลี่ยนจากขวดทดลองไปเป็นเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ให้รักษาอัตราการถ่ายเทออกซิเจนเชิงปริมาตร (kLa) ให้คงที่โดยการปรับการกวนและการเติมอากาศ
วันที่เผยแพร่: 17 สิงหาคม 2568




