Qual a quantidade de meio de cultura que deve ser adicionada ao frasco em uma incubadora com agitação?
Os frascos Erlenmeyer estéreis para cultura celular da RADOBIO são especificamente projetados para o cultivo de células em suspensão, incluindo células HEK 293 e CHO.incubadora com agitaçãoEsses frascos apresentam fundo plano e tampa ventilada, tornando-os adequados para desenvolvimento de processos em pequena escala, ampliação de escala e cultivo em múltiplos estágios. A tampa ventilada integra uma membrana hidrofóbica de 0,2 μm, que permite a troca gasosa eficiente, bloqueando a contaminação microbiana e a penetração de água, garantindo condições ideais para o crescimento celular.
Especificações principais e orientações de uso
- 1. Otimização do Volume de Trabalho
- •O volume do meio deve ser mantido entre 20 e 30% da capacidade total do frasco para garantir a transferência adequada de oxigênio e minimizar a tensão de cisalhamento.
- • As marcações de graduação nítidas no frasco permitem medições de volume precisas. .
- •O volume do meio deve ser mantido entre 20 e 30% da capacidade total do frasco para garantir a transferência adequada de oxigênio e minimizar a tensão de cisalhamento.
- 2. Parâmetros de agitação
- •Recomendadoagitador de incubadoraVelocidade de agitação: 75–120 RPM (ajustável de acordo com as necessidades experimentais)
- •Para frascos maiores (≥3 L), reduza a velocidade para 90 RPM para evitar cisalhamento excessivo do fluido e formação de espuma.
- •Recomendadoagitador de incubadoraVelocidade de agitação: 75–120 RPM (ajustável de acordo com as necessidades experimentais)
Parâmetros recomendados para células CHO e HEK 293
| Volume do frasco | Volume de trabalho | Velocidade de vibração |
|---|---|---|
| 125 mL | 25 mL | 120 RPM |
| 250 mL | 60 mL | 120 RPM |
| 500 mL | 150 mL | 120 RPM |
| 1000 mL | 350 mL | 120 RPM |
| 1500 mL | 400 mL | 120 RPM |
| 2000 mL | 400 mL | 120 RPM |
| 3000 mL | 800 mL | 90 RPM |
| 5000 mL | 2500 mL | 90 RPM |
Nota: Os dados se aplicam às linhagens celulares CHO Estável, CHO Transitória e HEK 293 Transitória.
Detalhes técnicos suplementares
- 1. Material e Esterilidade
- •Opções de material PETG/PC:O PETG oferece alta transparência e resistência ao impacto; o PC proporciona estabilidade térmica superior (suporta autoclavagem a 121°C).
-
- •Esterilização: Irradiado com raios gama, embalado individualmente, certificado como livre de DNase/RNase, livre de endotoxinas e em conformidade com os padrões da Classe VI da USP.
- •Opções de material PETG/PC:O PETG oferece alta transparência e resistência ao impacto; o PC proporciona estabilidade térmica superior (suporta autoclavagem a 121°C).
- 2. Vantagens do Design
- • Tampa ergonômica: Facilita o manuseio seguro e a compatibilidade com pipetas/raspadores de células.
- •Modelos com defletores disponíveis: Aumenta a eficiência da mistura em culturas de alta densidade, incrementando a transferência de oxigênio (kLa).
- • Tampa ergonômica: Facilita o manuseio seguro e a compatibilidade com pipetas/raspadores de células.
- 3. Notas importantes sobre o uso
- •Evite o enchimento excessivo: Volumes superiores a 30% podem reduzir as trocas gasosas, levando à hipóxia em culturas aeróbicas.
- •Monitorar pH/Oxigênio: Manter o pH entre 7,0 e 7,4 (células CHO) e o oxigênio dissolvido (OD) acima de 40% para um metabolismo ideal.
- •Sensibilidade ao cisalhamento: Para células sensíveis ao cisalhamento (por exemplo, células T primárias), utilize velocidades mais baixas (80–100 RPM) ou agentes antiespumantes.
- •Evite o enchimento excessivo: Volumes superiores a 30% podem reduzir as trocas gasosas, levando à hipóxia em culturas aeróbicas.
Aplicações além do cultivo padrão
- •Sistemas de perfusão: Integram-se às linhas de alimentação para fornecimento contínuo de nutrientes, atingindo densidades celulares >20 × 10⁶ células/mL
- •Culturas Microbianas: Adequadas para fermentação bacteriana/de leveduras, com design defletor para melhor aeração.
- •Protocolos de ampliação de escala: Ao fazer a transição de frascos para biorreatores, mantenha uma taxa de transferência de oxigênio volumétrica (kLa) consistente ajustando a agitação e a aeração.
Data da publicação: 17 de agosto de 2025